03BIOREADER 7000 V γ厂家免疫学基础研究
根据检测的细胞因子的不同,ELISPOT可以用来区分被activation的不同的T细胞亚群。例如Th1细胞主要分泌IFN-γ,IL-2和TNF-α,而其他一些细胞因子如IL-4,IL-5和IL-13一般是由Th2细胞分泌的。在过敏研究中的一个热点就是采用ELISPOT测定Th2型细胞因子,因为Th2反应是过敏的主要反应,但通常都是低频率岀现,需要高度灵敏方法才能被成功检测到。
04过敏研究
在针对特异反应性过敏的免疫treat中监测T细胞免疫反应;在细胞介导的接触过敏的体外检测诊断的应用中,ELISPOT方法受到越来越多过敏工作者的关注。因为对于像Th2型反应主要细胞因子IL-4这样的一贯很难通过其他方法如 flow cytometry和ELISA检测到的因子来说,应用高灵敏度的ELISPOT方法对于研究过敏原特异性免疫反应显得尤为重要。
病毒噬斑病毒斑点分析仪
德国BIOSYS公司bioReader是针对35-100mm培养碟、载片、6-384孔多孔板和微量培养板的自动检测和分析仪器。主要用于免YI细胞功能研究,在单细胞水平检测细胞因ZI分泌情况或抗TI分泌情况病毒斑,菌落,克LONG斑,等微生物斑点实验分析。产品成熟,1000多篇文献,国内有100多个科研单位使用。
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(一)原理:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后,再与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
(二)ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应,在Microplate reader上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万~30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb,在研究者以刺激剂activation细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。
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