RPA反应利用被称为重组酶的酶,这些酶与寡核苷酸引物形成复合体,并使引物与双链DNA中的同源序列配对。单链DNA结合(SSB)蛋白与被取代的DNA链结合,并使形成的D环保持稳定。然后从引物启动由聚合酶介导的DNA扩增,但前提是存在靶标序列。一旦启动,扩增反应将快速进行,因此开始时只需一点靶标DNA拷贝数,高特异性DNA扩增在数分钟内即可达到可检出水平。
为什么选择重组酶聚合酶扩增?
速度
RPA非常快速,在37-42°C这一通常适宜的反应温度下,只需少量核酸分子即可在3-10分钟(通常)内扩增至可检出水平,但这将取决于靶标大小。在大部分情况下,只需要一个人即可在半小时内采集样本、制备样本、运行检测并取得结果,并且无需专业培训。相比之下,现行的惯例是临床样本必须送往中心实验室进行处理,且周转时间为24小时。
灵敏度
RPA可检测复合样本中的单拷贝DNA和十拷贝或更少RNA,而无需预先纯化核酸。
TwistDx恒温扩增
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